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如何選擇分光光度計參比溶液,有技巧可尋

發(fā)表時間:2022-07-06      點擊次數(shù):11473
  分光光度計是一款將成分復雜的光,分解為光譜線的科學儀器,采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源,通過系列分光裝置,從而產(chǎn)生特定波長的光源,光線透過測試的樣品后,部分光線被吸收,計算樣品的吸光值,從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實驗室常規(guī)儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。
  因為參比溶液對光會存在一定的吸收,所以在比色前通常要將這部分吸收扣除,才更接近被測組分對光的吸收值,這樣才能通過校正曲線來算得被測組分的濃度。分光光度計在進行光度測量時,利用參比溶液來調(diào)節(jié)儀器的零點,可以消除由于吸收池壁及溶劑對入射光的反射和吸收帶來的誤差,并扣除干擾的影響。參比溶液可根據(jù)下列情況來選擇。
  分光光度計參比溶液的選擇
  1、溶劑
  試樣組成簡單,共存組分對測定波長的光無吸收。
  2、試劑
  顯色劑或其它試劑對測定波長有吸收,按顯色反應相同的條件,不加入試樣的試劑。
  3、試液
  試樣基體溶液在測定波長有吸收,顯色劑自身無色,可按與顯色反應相同的條件處理試樣,只是不加入顯色劑。
  4、平行操作參比
  用不含被測組分的試樣,在相同的條件下與被測試樣同時進行處理,得到平行操作參比溶液。
  如在進行某種藥物濃度監(jiān)測時,取正常人的血樣與待測血藥濃度的血樣進行平行操作處理,前者得到的溶液即可作為平行操作參比溶液。
  注意事項
  1、當試劑及顯色劑均無色時,可用蒸餾水作參比溶液。
  2、顯色劑有顏色,可選擇不加試樣溶液的試劑空白作參比溶液。
  3、顯色劑為無色,而被測試液中存在其它有色離子,可用不加顯色劑的被測試液作為參比溶液。
  4、顯色劑和試液均有顏色,可將一份試液加入適當掩蔽劑,將被測組分掩蔽起來,使之不再與顯色劑作用,而顯色劑及其它試劑均按試液測定方法加入,以此作為參比溶液,這樣就可以消除顯色劑和一些共存組分的干擾。
  5、改變加入試劑的順序,使被測組分不發(fā)生顯色反應,可以把此溶液作為參比溶液消除干擾。
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